Amanita verna, Funalia trogii, Suillus collinitus mantar ekstrelerinin normal ve kanser hücrelerine sitotoksik, genotoksik ve apoptotik etkilerinin araştırılması

Abstract

Bu çalışmada, Suillus collinitus, Amanita verna ve Funalia trogii'nin sitotoksisite, genotoksisite, apoptik, nekrotik ve hücre proliferasyon etkileri incelendi. Laboratuvarda kuru olarak korunan basidiokarplardan alınan parçalar, katı ve sıvı kültürde geliştirildi. Numuneler Soxhlet cihazında 80°C, %70'lik etil alkolde 1 saat ekstraksiyon edilerek sitotoksisite, apoptik ve nekrotik çalışmalar için hazırlandı. Sitotoksisite çalışmalarında, ekstrakt MCF-7 kanser hücreleri ve L929 Fibroblast hücrelere örnek konsantrasyonları 1mg/mL, 0.5mg/mL, 0.25mg/mL olarak uygulandı. WST-1 solüsyonu eklenerek inkübasyon sonucunda 440 nm dalga boyunda mikroplate okuyucuda absorbans ölçümü yapıldı. İkili boyama deneyi ile aynı hücre hattında apoptoz ve nekroz belirlendi. İkili boyama solüsyonu hazırlanarak MCF-7 kanser hücresi ve L929 Fibroblast hücrelere aynı konsantrasyonlarda uygulandı. İnkübasyon sonucunda floresan ataçmanlı mikroskop FITC ve DAPI filtresinde 20X büyütmede ölçüm yapıldı. Suillus collinitus yüksek konsantrasyonda (1mg/mL, 0.5mg/mL) MCF-7 kanser hücre hatlarında toksik etki (%86) gösterdi. Amanita verna ve Funali trogii mantarlarının anlamlı bir toksik etkisinin olmadığı gözlendi. Suillus collinitus'un apoptotik ve nekrotik etkilerine rastlandı. Amanita verna ve Funalia trogii'nin düşük indekslerde apoptotik ve nekrotik etkileri belirlendi. Genotoksisite çalışmalarında, mantar ekstreleri CHO hücrelerine örnek konsantrasyonları 25µg/mL ve 12.5µg/mL olarak uygulandı. Suillus collinitus, Amanita verna, Funalia trogii ekstrelerinin uygulanan konsantrasyonlarda genotoksik etki göstermediği belirlendi.

In this study, cytotoxicity, genotoxicity, apoptotic, necrotic and cell proliferation effects of Suillus collinitus, Amanita verna and Funalia trogii were investigated. Taken parts from dry-preserved basidiocarps in the laboratory were developed in solid and liquid culture. The samples were prepared for cytotoxic, apoptotic, necrotic, studies by extracting at 80°C and 1 h in ethyl alcohol at Soxhlet device. In cytotoxicity studies, sample concentrations for extract MCF-7 cancer cell and L929 Fibroblast cells were applied as 1mg/mL, 0.5mg/mL, 0.25mg/mL respectively. The WST-1 solution was added and the absorbance was measured in a microplate reader at a wavelength of 440 nm at the end of the incubation. Apoptosis and necrosis were detected in the same cell line as the double staining experiment. Binary staining solution was prepared and MCF-7 cancer cell and L929 fibroblast cells were applied at the same concentrations. As a result of incubation, the measurement was done at fluorescense microscopy at 20X magnification in FITC and DAPI filters. Suillus collinitus extract showed toxic effect (86%) at high concentrations (1mg/mL, 0.5mg/mL) on MCF-7 cancer cell lines. It was observed that Amanita verna and Funali trogii extracts did not have significant toxic effect. Apoptotic and necrotic effects of Suillus collinitus extract were found. Apoptotic and necrotic effects of Amanita verna and Funalia trogii at low indices were determined. In genotoxicity studies, sample concentrations for extracts CHO cells were applied as 25µg/mL and 12.5µg/mL respectively. It was determined that Suillus collinitus, Amanita verna, Funalia trogii extracts did not show genotoxic effects at applied concentrations.