Farklı dönemlerdeki in vivo üretilmiş sığır embriyolarında cinsiyetin dağılımının belirlenmesi ve cinsiyetin bu dağılıma etkisinin araştırılması

Abstract

Bu çalışmanın konusu, farklı dönemlerdeki in vivo sığır embriyolarının cinsiyetlerinin non elektroforetik PCR yön- temi ile tespit edilerek, cinsiyet dağılımının ve bu dağılımın arasındaki farkların cinsiyetten etkilenip etkilenmediğinin belirlenmesidir. Cinsiyet tayini amacıyla yedi günlük toplam 65 adet in vivo üretilmiş embriyo kullanıldı. Embriyo elde etmek için rutin süperovulasyon yöntemleri kullanıldı. Tohumlamalardan yedi gün sonra cerrahi olmayan yöntemle uterus yıkaması yapılarak embriyolar toplandı. Elde edilen embriyolar kalite değerlendirmesinin ardından cinsiyetleri tespit edildi. Embriyoların trophektoderm kısmından mikro manipülatöre bağlı mikro bıçak ile %10-30 oranında bir par- ça kesilerek biyopsi materyali alındı. Embriyodan biyopsi alma işlemi %20 FCS içeren D-PBS solüsyonu içerisinde yapıldı. Alınan biyopsi parçaları, lizis ve denaturasyon işlemleri amacıyla PCR cihazına yerleştirildi. Lizisi takiben DNA amplifikasyon işlemi 35 döngü olarak gerçekleştirildi. PCR cihazından çıkarılan tüpler, 302-312 nm dalga boyunda ışık veren UV lamba altında incelendi. Pembe renk veren embriyo “erkek embriyo” olarak belirlendi. Cinsiyet tayini yapılan embriyolardan kompakt morula aşamasında olan 30 embriyodan 14’ünün erkek (%46.7; 14/30), 16’sının dişi (%53.3; 16/30) cinsiyette; blastosist aşamasındaki 35 embriyodan 21’inin erkek (%60.0; 21/35), 14’ünün dişi (%40.0; 14/35) cinsiyete sahip olduğu tespit edildi. Blastosist aşamasındaki erkeklerin oranının (%60.0) morula aşamasına (%46.7) göre daha yüksek bulunmasına rağmen aralarındaki farklılık istatistik önemde bulunmamıştır (P0.05).

The objective of this study is to investigate whether sex distribution and the variance of this distribution are affected by sex. Sex detection of in vivo produced bovine embryos at different stages was made using non- electrophoretic PCR method. For sexing; in vivo derived day-seven 65 embryos were used. Embryos were obtained from routine superovulation procedure. After seven days of artificial insemination; embryos were collected by nonsurgical uterine flushing technique. The sex of the embryos was determined; following evaluation of the quality of embryos. 10-30% of the trophectoderm of the embryo was excised with a micro blade attached to the micro manipulator. Embryo biopsy procedure was carried out in D-PBS solution containing 20% FCS. The biopsy materials were placed in PCR instrument for lysis and denaturation. After lysis period, DNA amplification process was carried out in 35 cycles. The tubes taken out of the PCR instrument were inspected under UV illumination of 302-312 nm wave length. Pink fluorescence indicates the presence of a male sample. As a result of the sex determination out of 30 embryos; 14 male (46.7%; 14/30), 16 female (53.3%; 16/30) were determined at compact morula stage, out of 35 embryos; 21 male (60.0%; 21/35), 14 female (40.0%; 14/35) were determined at blastocyst stage. Even though the rate of males (60%) at blastocyst stage was higher than that at morula stage (46.7%), the difference was not found statistically significant (P>0.05).