Proliferation Of Mc3t3-E1 Osteoblastic Cells After Sequential Release Of Pdgf And Bmp-6. An In Vitro Study

Abstract

Background and Aim: To evaluate the release kinetics of bone morphogenetic protein (BMP)-6 or -7 loaded nanoparticles (NPs) that located inside the microparticles (MPs) carrying platelet-derived growth factor (PDGF), and test this NP-in-MP system with MC3T3-E1 osteoblastic cells. Materials and Methods: Poly-lactic acid-co-glycolic acid (PLGA) NPs was loaded with BMP-6 or -7 and inserted in sodium alginate MPs loaded with PDGF. To evaluate the osteoblastic effect; proliferation of MC3T3-E1 cells that were treated with BMP-6, -7 and PDGF free solutions (FS) or within the particles (BMP-6 or -7 loaded PLGA NP alone and BMP-6 or -7 loaded PLGA NP in PDGF loaded alginate MP) were assessed at 2, 4, 7, 14 and 21 days. Results: It was shown that while both NP and NP-in-MP systems showed similar burst release at first time periods; especially in 24-72 h time period, NP-in-MP system exhibited a sustained release profile till 14th day. According to proliferation experiments, till the 7th day, both particle and FS groups exhibited similar profiles, but after that time particle groups, especially BMP-7 NP in PDGF MP, reached to statistically higher cell numbers than FS groups. NP-in-MP system exhibited a gradually longer time factor release resulting with delayed but elongated cell proliferation period. Conclusion: Findings indicate that NP-in-MP system might be promising in future for mimicking the natural bone formation process by providing sequential release of PDGF and BMPs, for bone tissue engineering. More comprehensive experiments evaluating mineralization and gene expression profile is necessary to verify these results

Amaç: Mevcut çalışma trombosit kaynaklı büyüme faktörü (platelet-derived growth factor, PDGF) taşıyan mikropartiküller (MP) içerisine hapsedilmiş nanopartiküller (NP)'den kemik morfogenetik protein (bone morphogenetic protein, BMP)6 veya -7'nin salım kinetiğini değerlendirmek ve bu sistemi MC3T3-E1 osteoblastik hücreleri ile test etmektir. Gereç ve Yöntemler: Polilaktik asit-glikolik asit (PLGA) NP'ler BMP-6 veya BMP-7 ile yüklenmiş ve PDGF ile doldurulmuş sodyum aljinat MP'lere yerleştirilmiştir. Osteoblastik etkiyi değerlendirmek için serbest veya partiküller içerisinde yüklü (BMP-6 veya BMP-7 yüklenmiş PLGA NP ile PDGF yüklenmiş aljinat MP içerisinde BMP-6 veya BMP-7 yüklenmiş PLGA NP) BMP-6, -7 ve PDGF ile muamele edilip 2, 4, 7, 14 ve 21. günlerde incelenmiştir. Bulgular: İlk zaman periyotlarında hem NP hem de MP içerisinde NP sistemleri benzer patlayıcı salım miktarı gösterirken özellikle 24-72 saat zaman diliminde MP içerisinde NP sistemi 14. güne kadar uzamış bir salım profili ortaya koymuştur. Proliferasyon deneylerine göre 7. Güne kadar her iki partikül grubu ve serbest solüsyon grupları benzer profiller oluşturmuştur ancak bu periyottan sonra özellikle PDGF MP içerisinde BMP-7 NP grubu olmak üzere partikül grupları, FS gruplarına kıyasla istatistiksel olarak anlamlı düzeyde daha fazla hücre sayısına ulaşmıştır. MP içinde NP sistemi ise dereceli ve daha uzun süren bir faktör salımı yaparak gecikmiş ve uzamış bir yüksek hücre proliferasyon periyodu sağlamıştır. Sonuç: Mevcut deneylerin bulguları MP içinde NP sisteminin PDGF and BMP'lerin ardışık salımını sağlayarak gelecekte kemik doku mühendisliğinde doğal kemik formasyon sürecini taklit edebileceği konusunda ümit vermektedir. Ancak bu sonuçları doğrulamak için mineralizasyon ve gen ekspresyon profillerini içeren daha kapsamlı deneylere ihtiyaç vardır