Yazar "Parlak, Murat" seçeneğine göre listele

Listeleniyor 1 - 1 / 1
  • Küçük Resim
    Öğe
    Adipoz kök hücreden farklılaştırılmış kondrositlerin aljinat temelli mikrokürelerde enkapsülasyonu
    (Kırıkkale Üniversitesi, 2018) Parlak, Murat; Türk, Mustafa
    Doku mühendisliği biyoloji bilimlerini mühendislik ilkeleriyle birleştiren, hasara uğramış dokuların fonksiyonlarını geri kazanması amacıyla biyolojik bileşenlerin üretilmesi ve geliştirilmesi olarak tanımlanmaktadır. Kıkırdak doku mühendisliği modeliyle yapılan çalışmalarda hasarlı kıkırdak dokusuna, çeşitli fizikokimyasal yöntemlerle elde edilen polimerik iskelet yapılarınını üstüne istenilen sayıda hücre ekilerek implantasyonu hedeflenmektedir. Elde edilen polimerik iskelet yapıları, ekimi yapılan hücrelere hem mekanik destek hem de hücrelerin üzerlerinde tutunup çoğalabilecekleri üç boyutlu fiziksel ortam sağlamaktadırlar. Bu çalışmanın amacı, çeşitli hayvanlardan izole edilen in-vitroda kondrosite farklılaştırılan adipoz kök hücrelerin ve kondrositlerin, aljinat mikroküreler içerisinde hücresel canlılıklarını ve kendine özgü morfololojilerini aljinat doku iskelesine ve tek tabaka flask kültürüne göre daha iyi koruduğunu göstermektir. Koyunların lumbal bölgesinden elde edilen adipoz kök hücrelerin kondrosite farklılaştırılması in-vitro flask kültürlerinde gerçekleştirilmiş, 3. pasaj sırasında mikrokürelere ekimleri yapılmıştır. Koyunların artiküler bağ dokusundan elde edilen kondrosit hücreleri de kültüre edilip hem mikrokürelere hem de doku iskelelerine ekimi yapılmıştır. Aljinat mikroküre yapılarını elde etmek için %2'lik aljinat ve %2 aljinat-%1 hyaluronik asit karışımı 6x10^5 tane/ml kondrosit içeren 100 mikrolitre besiyeriyle karıştırılmış, sonrasında 23G bir şırıngadan CaCl2 çözeltisi içerisine damlatılıp çapraz bağlanmıştır. Aljinat doku iskelesi yapısı elde etmek için ise %2'lik aljinat çözeltisi %0,3'lük kitosan çözeltisi ile 5'e 2 oranında karıştırılmış sonrasında CaCl2 ile çapraz bağlanmış, 2 gün boyunca -80 0C'de dondurucuda bekletildikten sonra liyofilize edilip %70'lik alkolle sterilize edildikten sonra üzerlerine 6x10^5tane/ml kondrosit ekilmiştir. Koyunlardan elde edilen adipoz kökenli kök hücreler, antikor boyaması ve glikozaminoglikan (GAG) işaretleyicileri (marker) ile işaretlenerek kök hücre oldukları gösterilmiştir. Kök hücreler StemPro kondrojenik farklılaştırma ortamında yaklaşık 7-14 gün içerisinde kondrosit hücresine farklılaştırılmış, antikor boyaması ile gösterilmiştir. Ayrıca mikroskobik gözlemlerle kondrositten fibro-bağ farklılaşması (dedifferansiyasyon) gösterilmiştir. Sonrasında 3. pasaj sonrası kondrosit hücreleri aljinat mikrokürelere enkapsüle edilerek orijinal morfolojilerini geri kazanmış ve mikroküreler içinde hyalin kıkırdaktaki kondrositlerin sentezlediği kondroidin sülfatı yeniden sentezlemeye başladıkları Toluidine Mavisi boyaması ile gösterilmiştir. Son olarak koyundan izole edilen ve flask kültüründe çoğaltılan kondrosit hücreleri hem aljinat mikrokürelerde enkapsüle edilerek hem de aljinat doku iskeleleri (skaffold) üzerine ekilerek Alamar Blue testi ve mikroskop görüntüleriyle hücre canlılığı açısından karşılaştırılmış, çıkan sonuçlar bize mikroküre enkapsülasyonu tekniğininin, doku iskelesine ekim tekniğine ve düz flask kültürüne göre kondrosit hücrelerini orijinal morfolojilerine daha yakın bir görünümde olmalarını ve daha yüksek metabolik aktivite göstermelerini sağladıklarını göstermiştir. Elde edilen sonuçlarara göre kondrositlerin hücresel ekstrasellüler matriks bileşenlerinin kıkrdak dokusuna iletimi açısından aljinat mikrokürede enkapsülasyon tekniğinin, aljinat doku iskelesine ekim tekniğine nazaran daha etkili bir hücresel ilaç iletim mekanizması olduğu sonucuna varılmıştır. Ayrıca her iki aljinat polimerleşme tekniğinde de hidrojellerden flask kültür tabakasına besiyeri ortamında herhangi bir kondrosit hücresi aktarılmadığı görülmüştür. Enzimatik hidroliz uygulamalarıyla kondrositlerin mikrokürelerden geri elde edim teknikleri in-vitroda ve in-vivo çalışmalarla geliştirilebilir.