Procion Brown Mx-5BR bağlı poli (Hidroksietimetakrilat/Kitosan) membranlarının hazırlanması: Lizozimin saflaştırılmasında kullanılması ve seçiciliğinin HPLC ile tayini
[ X ]
Date
2004
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Access Rights
info:eu-repo/semantics/openAccess
Abstract
Membran materyalinin seçimi ve hazırlanması kromatografik performansı etkileyen önemli faktörlerden biridir. pHEMA'nm ve kitosanın kullanım özellikleri bir araya getirilerek kromatografik alanda kullanılabilecek olumlu özelliklere sahip yeni membran yapıda, kompozit bir matriks geliştirilmesi düşünüldü. Bu amaçla değişik kompozisyondaki afinite membranlarmın 2-HEMA monomeri ve doğal kitosan polimeri kullanılarak UV ışığı ve AIBN başlatıcısı varlığında fotopolimerizasyon yöntemi ile polimerzasyonunun sağlanması amaçlandı. Bu amaç doğrultusunda hazırlanan afinite membranın karakterizasyonu tamamlandıktan sonra bpya ligandı \"Procion Brovvn MX-5BR\" pHEMA ve pHEMA/kitosan membran yüzeyine kovalent olarak bağlandı. Boya ligandı bağlı pHEMA ve pHEMA/kitosan gözenekli hidrojel yapıdaki membranların, afnite destek malzemesi olarak hazırlanması ve lizozim enziminin saflaştırmasında kullanılması amaçlandı. Gıda sanayiinde önemli bir yeri olan lizozim enziminin yumurta akından saflaştırılması için afinite membranların performansları belirlendi. Afinite membranlarmın polarite ve serbest yüzey enerjileri, temas açısı ölçümleri ile belirlendi. Adsorpsiyon koşu İlamın (lizozimin başlangıç konsantrasyonu, ortam pH'sı, sıcaklık gibi faktörlerin) afnite membranının performansı üzerine etkisi araştırıldı. Boya ligand bağlı pHEMA ve pHEMA/kitosan membranlarmın optimum pH değeri ve lizozim adsorplama kapasitesi sırası ile pH 7.0'de 32.64 ve pH 6.0'da 49.2 mg/ml olarak belirlendi. Daha yüksek adsorpsiyon kapasitesi elde edilen pHEMA/kitosan^boya ligand afinite membranlara bazı metal iyonlarının bağlanması (daha seçici bir yapı oluşturularak) ile adsorpsiyon kapasiteleri üzerine etkisi araştırıldı. pHEMA/kitosan-boya ligand-Fe(UI) ve pHEMA/kitosan-boya ligand-Cu(ll) membranları için optimum pH ye adsorpladığı lizozim miktarı ise sırası ile pH 6.0'da 54.1 ve pH 7.0'de 50.3 mg/ml olarak bulundu.pHEMA ve pHEMA/kitosan membranlarının üzerine lizozimin non-spesifik adsorpsiyon miktarı sırası ile 2.0 ve 8.3 mg/ml olarak bulundu. pHEMA ve pHEMA/kitosan membranına boya ligandının bağlanması ile elde dilen maksimum adsorpsiyon kapasitesi sırası ile, 56.9, 79.1 mg/ml olarak belilendi. Afinite membranlarının adsorpsiyon kapasitelerinin artan iyonik şiddet ile azaldığı ve ortam sıcaklığı ile ise arttığı bulundu. Adsorpsiyon ve desorpsiyon kinetiği, adsorpsiyon izoterm modeli ve afinite membranların yeniden kullanılabilirliği gibi parametreler de incelendi- Geliştirilen afinite membralarla sulu ortamdan lizozim uzaklaştırılması işleminin Frşundlich ve Temkin adsorpsiyon izoterm modeline uyduğu bulundu. Boya ligandı bağlı membran sistemlerinde lizozimin adsorpsiyonunda ikinci dereceden kinetik eşitliğinin, afinite membranlarının adsorpsiyon kapasitesini belirlemek için en uygun eşitlik olduğu belirlendi. Ayrıştırma ve saflaştırma işlemlerinde lizozim aktivitesi, substrat olarak Micrococcus lysodeikticus bakterisi kullanılarak belirlendi. Geliştirilen afinite membraların farklı proteinler içeren yumurta beyazından lizozime karşı gösterdiği seçicilik ve adsorpsiyon kapasitesi, denge adsorpsiyon sonucunda ortamda kalan protein çözeltilerinin miktarı HPLC ile analizi sonucu belirlendi. Boya ligan bağlı pHEMA ve PHEMA/kitosan afinite membranlarından elüe edilen lizozimin saflığı ve geri kazanımları sırasıyla %76, %94 ve %63, %81 olarak HPLC ile belirlendi. Boya ligan ve metal iyonu bağlı pHEMA/kitosan membranın lizozimin ayrıştırılması ve saflaştırılması için en iyi sonuçlan sağladığı belirlendi. Tekrarlanan adsorpsiyon-desorpsiyon döngüleri sonrası sodyum hidroksit ile rejenerasyonu yapıldığında afinite membranlarının kararlı olduğu gözlendi.
Description
01.01.2004
Keywords
Biyoloji, Kimya, Organik, Biyoteknoloji ve Uygulamalı Mikrobiyoloji, Malzeme Bilimleri, Biyomalzemeler
